摘 要

本实验于2017年5-9月份，从贵州.遵义；四川.广安；陕西.汉中，商洛；辽宁大连,丹东；山东青岛松材线虫病疫区利用APF-I型诱剂诱捕各种天牛。共诱捕到31种天牛，合计6918头。经松材线虫自动化分子检测系统鉴定发现有8种天牛可携带松材线虫。其中西藏墨天牛，眼斑齿胫天牛，粗鞘双条杉天牛,樟泥色天牛，为首次发现其可携带松材线虫。除松墨天牛外，褐梗天牛，西藏墨天牛种群数量较大且携带松材线虫。

关键词：松材线虫；松树萎焉病；甲虫；传播媒介

A study on the species of the beetle carrying pine wood nematode in china

ABSTRACT

From May 2017 to September, collected all kinds of beetles in Zunyi,Guizhou province, Guangan,Sichuan province, Hanzhong and Shangluo,Shaanxi province, Dalian and Dandong,Liaoning province and Qingdao, Shandong province. A total of 16920 beetles (thirty-one species ) were collected in the Pine wilt disease epidemic areas in five provinces. Eight species of beetles can carry Pine wood nematode identified by Automatic molecular detector for pine wood nematode. It was discovered for the first time that Monochamus nigromaculatus Gressit, Paraleprodera diophthalma, Semanotus sinoauster Gressitt and Uraecha angusta could carry Pine wood nematode.

Key words：Pine wood namatode(PWN), pine wilt disease(PWD), beetle, vector

目录

1前言 - 1 -

1.1 研究背景 - 1 -

1.2松材线虫病媒介研究进展 - 1 -

1.2.1松材线虫病传播的媒介种类 - 1 -

1.2.2媒介天牛传播松材线虫的过程 - 2 -

2 材料与方法 - 4 -

2.1实验材料 - 4 -

2.2实验仪器 - 4 -

2.3研究方法 - 4 -

2.3.1 天牛诱捕 - 4 -

2.3.2天牛种类鉴定 - 5 -

2.3.2天牛携带松材线虫DNA的提取 - 5 -

2.3.3 松材线虫分子检测 - 5 -

3结果与分析 - 5 -

3.1 天牛种类及数量 - 5 -

3.2天牛携带松材线虫检测 - 8 -

4 讨论与结论 - 9 -

致 谢 - 11 -

参考文献 - 12 -

附录 - 14 -

1前言

1.1 研究背景

松材线虫Bursaphelenchus xylophius，是具有毁灭性的林木专一性病原线虫，所引发的松材线虫病(pine wilt disease）,又称松树萎蔫病、松树枯萎病,松树从被感染到枯死的过程最快仅需四十天时间。由于松材线虫病在松树林的扩展和蔓延非常迅速,带来的损失异常巨大，因而受到各国的重视，已被很多国家列为检疫对象。我国在松材线虫病的防治方面取得了一定进展,但面临的问题依旧很艰巨.

研究携带松材线虫天牛种类，是切断松材线虫传播途径,提高松材线虫病的监测和治理水平的重要内容，为松材线虫病的监控防治提供理论依据。但已有报道不够全面详尽，为更好的了解我国松材线虫媒介天牛种类，本研究从部分省份松材线虫病疫区收集天牛，并进行松材线虫自动化分子检测。

1.2松材线虫病媒介研究进展

1.2.1松材线虫病传播的媒介种类

据报道,世界范围内己经研究过与松材线虫病发生有关的昆虫种类有很多,至少有四十五种昆虫能够携带松材线虫，分别属于:吉丁科Buprestidae，天牛科Cerambycidae, 白蚁科Termitidae,小蠢科Scolytidae,象虫科Curculionidae，和。然而,不是只要能携带松材线虫的生物就一定可以传播此病。昆虫中，只有与松材线虫具有相同生活史的情况下，才能传播松材线虫病，成为媒介昆虫。媒介昆虫的取食行为与产卵，是松材线虫自然传播的基本方式。目前只有13种昆虫在研究中被发现能够传播松材线虫，全部属于天牛科墨天牛属，这些天牛种类的分布十分广泛，其中分布于亚洲的有松墨天牛（Monochamus alternatus），巨墨天牛（M．grandis），云杉花墨天牛（M．saltuarius），和云杉小墨天牛（M．grandis），分布在欧洲的为云杉小墨天牛和加罗墨天牛（M．gaUoprobincialis），其余8种均分布于北美洲。在其分布地，能够传播松材线虫的媒介昆虫往往是当地的优势种，例如在亚洲松材线虫的媒介昆虫主要是松墨天牛^[1]。北美洲的主要为卡罗莱纳墨天牛（M．carolinensis）^[2]，葡萄牙的主要是加罗墨天牛^[3]

墨天牛属Monochamus spp.的天牛种类被公认为松材线虫病传播过程中的主要媒介昆虫^[4]。在东亚及东北亚地区（中、日、朝等国家），松墨天牛（Monochamus alternatus）是松材线虫最重要的传播媒介^[5]。徐福元等人^[6]研究表明小灰长角天牛（ Acanthocinus griseus）、台湾长角天牛（A.gundaiensis）、纵坑切梢小蠹 （Tomicus piniperda）和黑翅土白蚁（Odontotermes formosanus）均可以携带松材线虫。刘曙雯等人^[7]，研究结果表明：小灰长角天牛、台湾长角天牛、松褐天牛、松瘤小蠹(Orthotomicus erosus)、马尾松白斑角胫象(Shirahoshizo insidiosus)、松纵坑切梢小蠹（Blastophagus piniperda）均可以传播松材线虫；孙绪艮等人^[8]认为褐梗天牛(Arhopalus rusticus)、巨墨天牛(M.grandis)、马氏带天牛(Phymatodes maaki)、短角椎天牛(Spondylis buprestoides)和马尾松角胫象可携带松材线虫。

1996 年，Makihara ^[9]从天牛形态学方面对日本、中国、朝鲜半岛分布的松褐天牛进行对比，指出了这些天牛在形态上的不同，并提出松墨天牛的近缘种包括：褐点墨天牛(M.notatus)、南美松墨天牛(M.titillator)、黑点墨天(M.mutator)、白点墨天牛(M.scutellatus)、卡罗莱纳墨天牛(M.carolinensis)和云杉花墨天牛(M.saltuarius)，日本白斑墨天牛(M.nitens)、赤锦天牛、短角椎天牛、双胞泥色天牛（Uraecha bimaculata）、褐梗天牛、黑角伞花天牛（Corymbia suceepanea）。在韩国松墨天牛和云杉花墨天牛可传播松材线虫病，赤锦天牛及密皱皮花天牛（Rhagium rugipenne）也有传播松材线病的可能^[10]。在北美地区尤其是美国，黑点墨天牛、白点墨天牛、卡罗莱纳墨天牛、，南美松墨天牛（M.titillator）、褐点墨天牛和钝角墨天牛M.obtusus均为可传播此病的媒介昆虫，Linit^[11]指出卡罗莱纳墨天牛是美国地区最主要的媒介昆虫。加拿大地区有14种昆虫可作为传播松材线虫病的媒介昆虫，包括6 种天牛：褐点墨天牛、卡罗莱纳墨天牛、香枞墨天牛(M.marmorator)、钝角墨天牛、白点墨天牛，南美松墨天牛以及褐梗天牛亚种Arusticus obsoletus。在墨西哥褐点墨天牛（M.notatus）、红粗点墨天牛（M.rubigineus）为松材线虫的传播媒介^[12]。葡萄牙地区，松材线虫的主要媒介昆虫是高卢墨天牛（M.galloprovincialis）。

1.2.2媒介天牛传播松材线虫的过程

松材线虫病的传播途径主要有两种：一是自然传播，通过媒介昆虫（在我国主要为松墨天牛）携带松材线虫传播到周围的松属植物。或者通过病株与健康株根部接触而传播，然而这样的传播方式是个别现象且传播范围小。二是人为传播，携带有松材线虫和传播媒介的原木、枝杈、木材加工制品等通过人为的运输等从一个地区搬运到另一个地区时会将病害传播到非感染区，随着现在交通运输和物流产业的日益发达，这种传播方式的危害日益增大，并且以其传播速度快，传播区域广等特点，成为最危险的传播途径。