摘 要

随着蛋白质组学研究的发展，已被广泛地应用到植物学研究中。基于胶的植物蛋白质学研究中，蛋白质提取是蛋白质组学研究的第一步，也是关键的一步。蛋白质提取的质量直接影响着后期蛋白质的分离和鉴定。由于植物蛋白质的复杂性和多样性，目前仍没有一种适合所有植物组织、器官的提取方法。但是一个重复性高、质量高、纯度高的蛋白质提取方法是植物蛋白质组学分析的首要的。本文首先分析了国内外研究现状，然后研究比较了杉木种子蛋白质提取的几种方法：SDS/醋酸沉淀，酚抽提/醋酸酸铵沉淀法，三氯乙酸/丙酮组合式法，最后，我们对比了不同提取方法样本蛋白质凝胶显示、斑点检测和分子量分布范围，选择了杉木种子蛋白质的最优提取方法——三氯乙酸/丙酮沉淀法，为后期大规模杉木种子蛋白质组研究打下基础。

关键词：杉木 种子 蛋白质提取方法

Analysis of different seed protein extraction methods

Abstract: With the development of proteomics research, it has been widely applied to the study of plants. In the plant protein study based on gel, protein extraction is the first step in proteomics research and is also a key step. The quality of protein extraction directly influences the protein separation and identification. Due to the complexity and diversity of plant proteins, there is still no a suitable extraction method for all plant tissues and organs. But a high repeatability, high quality and high purity of the protein extraction method is the first and foremost for plant proteomics analysis. In this paper, the research status was analyzed in the domestic and international. And then, we compare several protein extraction methods, such as trichloroacetic acid/acetone precipitation method, phenol extraction/ammonium acetate acid precipitation, SDS extraction /acetate precipitation method. Finally, we compared the gel maps, spot detection and molecular weight distribution of sample protein from different extraction method and chose the best seed protein extraction method of Chinese fir—trichloroacetic acid/acetone precipitation method. This study lays the foundation for the following large-scale Chinese fir seed proteome research.

Key words: Chinese fir seed, protein extraction methods

目 录

1 文献综述 …………………………………………………………….……………1

1.1研究现状…………………………………………………………….………..…1

1.1.1 国外研究现状…………………………………………………….…………1

1.1.2 国内研究现状………………………………………………….……………1

1.1.3总结…………………………………………………….………………….…3

1.2总结与展望…………………………………………………….…………..……3

2 正文 …………………………………………………………….…………………4

2.1 前言…………………………………………………………….………….……4

2.2 材料与方法…………………………………………………………….….……4

2.2.1 植物材料…………………………………………………………….…..…..4

2.2.2 提取方法……………………………………………………………...……..4

2.2.3 双向电泳……………………………………………………………...……..5

2.2.3.1 等电聚焦………………………………………………………...…….…5

2.2.3.2 SDS-PAGE电泳………………………………………………...……….6

2.2.3.3凝胶图象采集与分析………………………………………….…………7

2.3 结果与讨论………………………………………………………….….………8

2.3.1 蛋白质产量………………………………………………………..…….…..8

2.3.2 三种提取方法的评估…………………………………………….…………9

2.3.2.1 凝胶显示……………………………………………………...………….9

2.3.2.2 斑点检测…………………………………………………..….…………11

2.3.2.3 分子量分布范围……………………………………………...…………11

结论…………………………………………………………….…………………….12

致谢…………………………………………………………….…………………….13

参考文献…………………………………………………………….……………….14

1. 文献综述

1.1研究现状

1.1.1 国外研究现状

Carpentier等2005年研究了从植物组织中提取的蛋白质并评估了四种方法：经典的三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法、柠檬酸/丙酮沉淀和分离,分馏法和苯酚萃取甲醇/醋酸铵沉淀法^[1]。该实验应用了香蕉、土豆和苹果三种植物，结果证明只有古典TCA /丙酮沉淀法和苯酚萃取方法是有用的标准方法。

TCA/丙酮沉淀法和分级的提取是根据雅可布等人进行的。经典TCA/丙酮是一种非常有效的沉淀剂，能瞬间消除蛋白水解。苯酚提取程序具有高清理能力。此外，苯酚是最强的游离药物，它对蛋白质有较强的溶剂作用。苯酚提取程序的缺点是比其他样品制备方法耗时且苯酚有毒。丙酮沉淀法和苯酚提取甲醇/醋酸铵沉淀无统计学差异。这项研究清楚表明虽然损失的蛋白质是不可避免的，但是当处理顽固性组织时，降水是绝对必要的。它也显示了损失是可重复的，这意味着TCA/丙酮沉淀法和苯酚萃取-甲醇/醋酸铵沉淀法是有用的。这两种方法都与一个小但可再生的损失蛋白质有关。每个提取方法和随后的分析方法有其物理化学限制，这两种方法应该在结果调查之前,选择一个合适的方法。