摘 要

雪落樱（Cerasus xueluoensis）为蔷薇科（Rosaceae）樱属（Cerasus）植物，是一种高山矮生樱花，其花色淡雅，树形优美，具有极大的开发利用价值。本文选择江西庐山，湖南大围山，湖北利川，湖北建始，湖北雪落寨，浙江大仰山共6个雪落樱野生居群中的180份材料进行基因组DNA提取，筛选出了7对合适于雪落樱研究的SSR引物并优化了雪落樱的SSR-PCR程序。主要研究结果如下：（1）雪落樱叶片含有多糖物质较难与DNA分离，采用CTAB裂解——硅珠吸附法可较好的提取DNA。（2）AM287842、MA007a、MA016b、CPSCT044、BPPCT040、DY647422、UDPGA98-406这7对引物适用于雪落樱的PCR扩增反应，可得到清晰且多态性较好的条带。（3）SSR-PCR反应体系的建立可应用于雪落樱遗传多样性的研究。

关键词：雪落樱；SSR；引物筛选；PCR-SSR扩增程序优化；DNA提取优化

primer selection in SSR of Cerasus xueluoensis

ABSTRACT

Cerasus xueluoensis, belonging to Cerasus (Rosaceae), is a new resource of dwarf type. Its elegant color flower and beautiful shape trunk have great development value. This paper chooses 6 wild populations and 180 samples to optimize the SSR amplification procedure of Cerasus xueluoensis. Meanwhile This paper screened 7 SSR markers, which is suitable for diversity studies of Cerasus xueluoensis from 17 related primers. The main results are as follows:

1. Cerasus xueluoensis containing polysaccharides and other substances is difficult to separate DNA. This problem can be solved by CTAB cracking - silica beads adsorption method.

2.These primers(TAM287842, MA007a, MA016b, CPSCT044, BPPCT040, DY647422 and UDPGA98-406 ) apply to PCR amplification reaction of Cerasus xueluoensis.

3.Establishing the SSR reaction system of Cerasus xueluoensis can be used in Study on genetic diversity of Cerasus xueluoensis.

Key words：Cerasus xueluoensis；SSR；primer selection; optimization of SSR amplification procedure; optimization of DNA extraction

目 录

1 前言…………………………………………………………………………………………………………1

2 文献综述……………………………………………………………………………………………………2

2.1 樱属分类学研究进展………………………………………………………………………2

2.2 樱属形态学研究进展………………………………………………………………………2

2.3 樱属细胞学研究进展………………………………………………………………………3

2.4 樱属生态学研究进展………………………………………………………………………3

2.5 樱属分子生物学研究进展…………………………………………………………………4

2.5.1 RELP分析………………………………………………………………………4

2.5.2 RAPD分析………………………………………………………………………4

2.5.3 SSR分析…………………………………………………………………………4

2.5.4 AFLP分析………………………………………………………………………4

2.6 研究目的与意义……………………………………………………………………………5

3 材料与方法…………………………………………………………………………………………………6

3.1 材料采集……………………………………………………………………………………………6

3.2 试验方法……………………………………………………………………………………………6

3.2.1 总DNA的提取与纯化…………………………………………………………6

3.2.2 SSR-PCR扩增反应……………………………………………………………7

3.2.3 电泳分析……………………………………………………………………………8

4 结果与分析…………………………………………………………………………………………………10

4.1 雪落樱分子材料野外采集保存的最佳方法…………………………………………10

4.2 雪落樱DNA提取方法优化…………………………………………………………………10

4.3 雪落樱SSR引物筛选结果……………………………………………………………………11

4.4 雪落樱SSR-PCR反应体系的优化…………………………………………………………12

结论 …………………………………………………………………………………………………14

致谢 ………………………………………………………………………………………………15

参考文献 …………………………………………………………………………………………16

附录 ………………………………………………………………………………………………18