摘 要

本试验旨在通过日粮中添加不同水平的银杏叶发酵物，研究其对肉鸡的生产性能、抗应激能力以及抗氧化功能的影响。试验选择体重相近、1日龄的AA肉鸡648只，按单因子完全随机设计随机分为6组，每组6个重复，每个重复18只鸡。1组为空白对照组，5个处理组分别在基础日粮中添加0.15%、0.25%、0.35%、0.45%及0.55%的银杏叶发酵物。试验期分为前期1-21d和后期22-42d两个阶段。结果表明：（1）添加0.35%银杏叶发酵物可显著提高试验全期的日均采食量（ADFI）和日均体增重（ADG）（Plt;0.05），对料重比（F/G）没有显著影响（Pgt;0.05）；0.45%的银杏叶发酵物可显著提高试验前期ADG和ADFI，显著降低F/G（Plt;0.05），并呈一定的二次关系。但0.55%的银杏叶发酵物显著降低了试验后期和试验全期的ADG，显著增加了试验后期和试验全期的F/G（Plt;0.05）；（2）添加0.35%-0.55%银杏叶发酵物可显著提高血清、肝脏以及肌肉的抗氧化功能（Plt;0.05）。综上所述，本试验建议银杏叶发酵物在肉鸡玉米豆粕型配合饲料中的最佳添加剂量为0.35%-0.45%

关键词：银杏叶发酵物；生产性能；抗氧化能力；肉鸡

Effect of fermented Ginkgo biloba leaves (FR) on the anti stress and antioxidant capacity of broiler chicks

ABSTRACT

Effect of Aspergillus niger fermented Ginkgo biloba (FR) leaves on growth performance, anti stress and antioxidant capacity of broiler chicks were investigated. 648 day-old Arbor Acres broilers chicks were randomly allocated into 6 dietary treatments, with 6 replicates, 18 birds each. All the treatments were then denoted as control group (basal diet), FR groups (containing respectively 0.15%, 0.25%, 0.35%, 0.45% and 0.55% FR) in the diets. The whole experiment lasted for 42 days (the starter period 1-21d and the finisher period 22-42d). The results on performance showed that (1) Add 0.35% FR can significantly improve the entire test period the average daily feed intake (ADFI) and the average body weight gain (ADG) (Plt;0.05), the feed/gain ratio (F/G) had no significant effect (Pgt;0.05);0.45%FR can significantly improve the test early ADG and ADFI, and a significant (Plt;0.05) reduction of feed/gain ratio (F/G), they showed quadratic relationship. However, 0.55%FR significantly lowered the ADG at the end of the trial and the whole test period, and significantly increased the F/G (Plt;0.05) at the end of the trial and the whole period of the trial; (2) 0.35%-0.55%FR can significantly improve serum and liver and muscle antioxidant function (Plt;0.05) In conclusion, this experiment suggested FR of corn soybean meal in broilers with the best additive in feed for 0.35%-0.45%

Key words: Fermented Ginkgo biloba leaves; growth performance; antioxidant capacity; broiler

目 录

摘 要 2

前 言 - 1 -

1. 文献综述 - 2 -

1.1银杏叶生物活性成分 - 2 -

1.1.1银杏叶概述 - 2 -

1.1.2黄酮类化合物 - 2 -

1.1.3萜类化合物 - 2 -

1.1.4聚戊稀醇 - 3 -

1.1.5烷基酚酸类 - 3 -

1.1.6有机酸 - 3 -

1.2 银杏叶在养殖业中的研究现状 - 3 -

1.2.1银杏叶在养殖业中的研究总述 - 3 -

1.2.2银杏叶生物饲料提高家禽免疫功能 - 4 -

1.2.3银杏叶生物饲料提升屠宰性能及肉质 - 4 -

1.3微生物发酵工程 - 5 -

1.3.1微生物发酵简介 - 5 -

1.3.2微生物发酵工艺 - 5 -

1.3.2.1分批发酵 - 6 -

1.3.2.2连续发酵 - 6 -

1.3.2.3流加发酵 - 7 -

1.4地衣芽孢杆菌 - 7 -

1.4.1地衣芽孢杆菌概述 - 7 -

1.4.2地衣芽孢杆菌作用 - 8 -

1.4.3地衣芽孢杆菌研究与用成果 - 8 -

1.4.3.1地衣芽孢杆菌应用与植物病害防治研究 - 8 -

1.4.3.2地衣芽孢杆菌应用于饲料加工研究 - 8 -

1.4.3.3地衣芽孢杆菌应用于医药研究 - 9 -

1.4.3.4地衣芽孢杆菌应用于环境污染防治研究 - 9 -

1.5银杏叶发酵物 - 9 -

1.5.1银杏叶发酵物特性 - 9 -

1.5.2银杏叶发酵物饲料研究与应用 - 10 -

1.5.2.1银杏叶发酵营养成分变化 - 10 -

1.5.2.2银杏叶饲料复合酶的固态发酵条件及产物分析 - 10 -

1.5.2.3 银杏叶发酵与未发酵提取物的抑菌活性研究 - 11 -

1.5.2.4银杏叶发酵物在动物生产中的应用 - 11 -

1.5.2.4.1提高动物生产性能 - 11 -

1.5.2.4.2提高动物免疫和抗氧化性能 - 11 -

2 材料与方法 - 13 -

2.1 试验材料 - 13 -

2.2 试验设计与日粮配制 - 14 -

2.3饲养管理 - 14 -

2.4试验日粮 - 14 -

2.5 测定指标及方法 - 14 -

2.5.1 生产性能 - 14 -

2.5.2抗氧化指标（血清和肝脏组织） - 14 -

2.5.3血清皮质醇 - 14 -

2.6 数据处理与分析 - 15 -

2.7 统计分析 - 16 -

3 结果与分析 - 16 -

3.1 不同添加剂量银杏叶发酵物对肉鸡生产性能的影响 - 16 -

3.2 不同添加剂量银杏叶发酵物对肉鸡抗氧化功能的影响 - 17 -

讨 论 - 1 -

致 谢 - 2 -

参考文献 - 3 -

前 言

研究表明，银杏叶拥有独特的多种活性成分。这些生物活性物质主要是黄酮类化合物和萜类化合物（银杏内酯B和白果内酯）。其中，黃酮类化合物含量较高，约为2.5%~2.9%，是银杏叶提取物（EGB）的主要药用部分。黄酮类化合物是一类低分子天然植物成分，系植物体多酚类的代谢物，具有C3-C6-C3的基本结构，主要是单黄酮（Monoflavones）、黄酮醇（Flavonols）及其甙类；双黄酮（Bioflavones）及儿茶素类（Latechines）等。黄酮类有效成分为黄酮苷（flavonoid gycosides），主要是山萘酚（kaempferol）和槲皮素（quercetin）的葡萄糖异鼠李糖甙（gucorhamnoside esters）。它们通常与糖苷结合，是极好的天然抗氧化剂。目前已从银杏叶中分离出了38种黄酮类化合物。LeBars等研究表明，银杏叶中含有的黄酮类化合物、萜类化合物和有机酸类使其具有抗氧化的特性和清除自由基的药理活性。本研究是在现有银杏叶生物饲料添加剂研究的基础之上，通过微生物发酵使原来不易消化吸收的大分子物质经微生物的转化变成小分子后易于肠粘膜吸收，使血液中的有效成分迅速达到有效浓度，可以更好的提高动物的抗应激和抗氧化功能。

在畜牧生产中，微生物发酵是一种能够产生具有生物活性物质的有效途径，进而促进动物的生长和健康。通过微生物对中草药进行发酵处理在很久前就有若干报道，例如，Miyake等及Lin和Chiang研究发现，发酵能够改变中药的生物活性成分，增强作用效果。在畜牧生产中，若干年前，通过微生物保存饲料或液体发酵就开始在反刍动物和猪饲料中应用，且取得了良好的饲喂效果。然而，截至目前，国内外关于银杏叶发酵饲料对肉鸡生长发育的研究报道尚比较缺乏。南京林业大学以银杏叶为主要原料，运用优良的菌种，通过酶工程和微生物发酵工程，将银杏叶中动物难以消化的大分子营养源降解为易消化吸收的小分子物质，使银杏叶中固有的活性成分游离、暴露出来，更易被动物吸收。发酵后的产物除含有黄酮类化合物、银杏内酯等活性物质外，还含有大量的有益菌和高活力的复合酶。银杏叶的微生物发酵物作为一种新型饲料添加剂，以其绿色环保、使用安全等特点正逐步引起国际饲料和养殖界的广泛关注，显示出较大的研究开发前景。本研究首次将银杏叶通过地衣芽胞杆菌发酵使原来不易消化吸收的大分子物质经微生物的转化变成小分子后易于肠粘膜吸收，使血液中的有效成分迅速达到有效浓度，可以更好的提高动物的生产性能和健康水平。

1 文献综述

1.1银杏叶生物活性成分

1.1.1银杏叶概述

银杏叶为银杏科植物银杏（Ginkgo biloba L.）的干燥叶，叶多皱折或破碎，革质无毛，完整者呈扇形，长3～12cm，宽5～15cm，黄绿色或浅棕黄色^[1]。上缘呈不规则的波状弯曲，有的中间凹入。秋季密集，叶绿时采收，及时干燥。性甘、平，味苦涩。归心、肺经。在中医入药上经常使用，用于治疗冠心病、心绞痛、高血脂等。银杏叶的主要化学成分复杂，种类较多，并且有许多成分具有生理活性。其主要有黄酮类、萜类化合物、聚异戊二烯、多种氨基酸、矿物质、有机酸、银杏多糖和微量元素^[2]。

1.1.2黄酮类化合物

银杏叶中已分离的黄酮达40余种，已鉴定其结构的有20种，总黄酮含量为2.5～2.9%，是银杏叶提取物的主要药用部分，主要为单黄酮类和双黄酮类。单黄酮类主要有10种，包括山柰黄素、鼠李黄素、木犀草素、槲皮素等。银杏的双黄酮类是由两分子黄酮母核通过C-C键聚合而成的一类化合物，主要包括穗花衫双黄酮、银杏双黄酮、去甲银杏双黄酮、异银杏双黄酮等。银杏的双黄酮类化合物彼此结构相似，分离有一定困难，但Francoise Briancon-scheid用高效液相色谱法成功的解决了这一问题^[3-5]。黄酮类化合物具有极佳的抗氧化功能，抑制细胞凋亡。

1.1.3萜类化合物

萜类化合物是银杏叶提取物中主要的活性成分之一，是一类特异有效的血小板活化因子（Platelet Activating Factor ,PAF）受体拮抗剂，包括银杏内酯（属于二萜类化合物）和白果内酯（属于倍半萜类化合物）2类^[6]，能抗血小板活化因子作用，防止血小板聚集，抗自由基。银杏内酯分子化学结构独特，为十二碳骨架结构，嵌有一个叔丁基和六个五元环，包括一个螺壬烷，一个四氢呋喃和三个内酯环，尚未在其他植物中发现。白果内酯结构与青蒿素相似。

1.1.4聚戊稀醇

银杏叶中的长链多聚异戊二稀醇有抗肿瘤活性。聚戊稀醇是一类类脂化合物，由一系列异戊稀单元和终端异戊稀醇单元组成，其链长在不同的植物中不同。

1.1.5烷基酚酸类

此类化合物极性小，可溶于非极性溶剂中，难溶于低级醇类，不溶于水。烷基酚酸类被认为是银杏叶中的毒性成分，可能与致过敏、致突变作用有关（李开泉等，2002）^[7]。

1.1.6有机酸

银杏叶中存在多种有机酸，占EGB的5%～10%。目前已分离出抗坏血酸、乙酸、莽草酸、亚油酸、4-羟基苯甲酸、6-羟基犬尿喹啉酸等。其中6-羟基犬尿喹啉酸首次从裸子植物中得到，它的活性颇受注意。可能是中枢神经氨基酸拮抗剂，作用于N-甲基-D-门冬氨酸，可能具有增强脑细胞耐缺氧的能力、改善脑代谢的作用^[6,7]。

1.2 银杏叶在养殖业中的研究现状

1.2.1银杏叶在养殖业中的研究总述

银杏叶有独特的多种活性成分，其中比较重要的成分有：萜类化合物(包括银杏内酯A、B、C、白果内酯)、黄酮苷、双黄酮、原花青素、烷基酚、聚戊烯醇类化合物等(Teris and Paola，2009)。自20世纪60年代以来，由于发现其叶片提取物具有治疗心脑血管等疾病的作用，我国和许多国家都在深入地研究和大规模地种植银杏(曹福亮，2007)^[8]。

1.2.2银杏叶生物饲料提高家禽免疫功能

曹福亮等(2006)^[9]银杏叶生物饲料添加剂对黄羽肉仔鸡生长及免疫的影响结果表明：添加了银杏叶生物饲料添加剂的各组肉仔鸡的胸腺，脾脏和法氏囊的相对质量均在不同程度上高于对照组，其中添加1.0%组脾脏相对质量显著高于对照组，表明银杏叶生物饲料添加剂对肉仔鸡免疫器官有一定的增重作用，有利于增强肉仔鸡的免疫性能。

1.2.3银杏叶生物饲料改善屠宰性能及肉品质

陈桂银等（2006）^[10]银杏叶生物饲料添加剂对黄羽肉鸡屠宰性能及肉品质的影响，结果表明：银杏叶生物饲料添加剂能提高肉仔鸡屠宰性能，其中屠宰率以添加0.5%组最高，半净膛率以添加1.0%组最高，显著高于其他组。全净膛率、胸肌率以添加1.0%组和1.5%组较高，均显著高于添加0.5%组和对照。